YFX-CLR018
1×106cells/T25培养瓶
￥1500
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背景描述 |
NR8383 (正常大鼠，1983年)来源于肺灌洗时的正常大鼠肺泡巨噬细胞。细胞在gerbil肺细胞连续培养液存在下培养了大约8-9个月。随后，不再需要外源生长因子。通过有限稀释法从单个细胞克隆并亚克隆NR8383细胞，并三次用软琼脂亚克隆。细胞表现出巨噬细胞的特性，吞噬酵母多糖和铜绿，非特异性脂酶活性，Fc受体，氧化降解；分泌IL-1, TGF-β和IL-6，可重复地响应外源生长因子。NR8383细胞响应博莱霉素，分泌TGF-β前体。在博莱霉素刺激下，TGF –β mRNA表达也上升。细胞对内毒素敏感。1-10 钠克/毫升的LPS水平抑制增生达50%。 即使达到0.001毫克/毫升的水平，LPS抑制还是无毒且在后续过程中可逆的。NR8383细胞株提供了高响应的肺泡巨噬细胞的均一来源，可以用于体外研究巨响细胞相关活性。 |
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细胞形态 |
巨噬细胞样，半悬浮生长。 |
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规格 |
>1x106 细胞数量，T25瓶或者1mL冻存管包装。 |
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细胞来源 |
大鼠肺，巨噬细胞。 |
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培养基 |
Ham's F-12K＋15% FBS＋1% GlutaMAX-1+ 1% P/S。 |
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培养条件 |
气相：空气，95%；二氧化碳，5%； 温度：37℃；培养箱湿度为70%-80%。 |
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传代比例 |
1:2-1:5；第一次收到细胞建议T25培养瓶1：2传代。 |
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换液频率 |
2-3天。 |
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细胞冻存液 |
无血清冻存液。 |
1、收到细胞后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h，若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染，请拍照后及时联系我们。
2、请在4或5×显微镜下确认细胞状态，同时给刚收到的细胞拍照（10×，20×）各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存，作为售后时收到时细胞状态的依据。
3、贴壁细胞：细胞在37℃培养箱中放置2-3h，显微镜下观察细胞的生长和贴壁情况，有些贴壁细胞在快递运送过程中会因振动脱落和脱落后成团的情况。若镜下观察细胞的生长密度若在60%以下，可去除培养瓶中灌液培养基（若有未贴壁的细胞需要离心回收，重悬打入到原培养瓶中）,加入新配制的完全培养基6-8mL，放到细胞培养箱中继续培养。若细胞生长密度达70%-80%以上，可以对细胞进行传代处理。传代过程中，若因运输振动脱落的细胞需要离心回收。
4、备注：运输用的培养基不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。 收到细胞后第一次传代建议T25培养瓶1：2传代 。
对于半贴壁细胞传代可以参考以下方法：
1、收集：将培养瓶中的悬浮的细胞收集到离心管中。用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。由于细胞贴壁不牢PBS润洗后细胞会脱落所以PBS也要回收到离心管中。
2、加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培养瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL）置于37℃培养箱中消化1-2分钟（难消化的细胞可以适当延长消化时间），然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入3-4mL含10%FBS的培养基来终止消化。
3、将收集到的悬浮细胞、pbs清洗液中的细胞和消化下来的贴壁细胞以1000rpml离心5min，弃去上清，补加1-2mL培养液后重悬混匀后将细胞悬液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照说明书要求配置的新的完全培养基以保持细胞的生长活力，后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。
注：如细胞不能一次性完全消化，可采取如下方法：
A. 准备一个无菌的 15mL离心管，加入 2mL完全培养基。
B. 将消化下来的细胞加入到上述离心管中。
C. 向之前消化的培养瓶中加入 1mL 胰酶继续消化2min左右，轻拍培养瓶，95%左右细胞脱落后加入2mL含 10%FBS 的完全培养基中和，中和后的细胞悬液移入A中的离心管内。
收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。下面T25瓶为例；
1、细胞冻存时按照细胞传代的过程收集消化好的细胞到离心管中，可使用血球计数板计数，来决定细胞的冻存密度。一般细胞的推荐冻存密度为1×106~1×107个活细胞/mL。
2、1000rpm离心3-5min，去掉上清。用配制好的细胞冻存液重悬细胞 ，按每1mL冻存液含1×106~1×107个活细胞/mL分配到一个冻存管中将细胞分配到冻存管中，标注好名称、代数、日期等信息。
3、将要冻存的细胞置于程序降温盒中，-80度冰箱中过夜，之后转入液氮容器中储存。同时记录好冻存管在液氮容器中的位置以便后续查阅和使用。
1、将恒温水浴锅中的水预热到37℃。
2、准备一支15mL离心管，加入5mL完全培养基，放入 37℃水浴锅中预热。
3、戴上护目镜，厚毛线手套后，从液氮罐中取出要复苏的细胞，尽快转入 37℃恒温水浴锅中复温晃动冻存管以提高复温速率。
4、将融化了的冻存管中的细胞吸入事先准备的离心管中，混匀后，1000rpm 离心 5min。
5、准备一个 T-25 培养瓶，写上细胞名称、日期，再加入 4mL完全培养基。
6、离心完成后弃去上清，用 1mL完全培养基重悬细胞后，转入 T-25 细胞培养中，混匀后转入CO2 培养箱中培养静置。
1、NR8383细胞聚团悬浮生长，且长得比较慢。细胞在低密度时有少量细胞团粘附瓶底，细胞高密度时为全悬浮状态。
2、细胞复苏后增殖慢需要7天左右，3天后换液一次。细胞应高密度冻存。该细胞传代时不需要用胰酶消化。传代时，用无菌细胞刮刮拭培养表面将细胞刮落，收集离心后重悬接种到新的培养瓶中。
3、所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。
4、从液氮中取出细胞冻存管时，若冻存管内有液氮进入，需拧松冻存管，排出内部残留的液氮，之后拧紧冻存管，置于干冰上，然后放入 37℃水浴中，避免温差太大造成液氮快速气化而爆炸。
