5x蛋白上样缓冲液 （含DTT)

产品简介

蛋白上样缓冲液主要由TRIS、SDS、溴酚蓝、还原剂等组成。SDS 可与蛋白质结合使蛋白质-SDS 复合物上带有大量的负电荷，这使蛋白质本身的电荷完全被 SDS 掩盖，消除了各种蛋白质本身电荷的差异；SDS 还可以断开分子内和分子间的氢键，破坏蛋白质分子的二级结构和三级结构。还原剂可以断开半胱氨酸残基之间的二硫键，破坏蛋白质结构，消除了蛋白结构之间的差异，最终无电荷及结构上差异的蛋白（亚单位），电泳速度只是与其分子量大小有关，溴酚蓝作为电泳指示剂，可大概指示电泳结束的时间。

翼飞雪SDS-PAGE蛋白上样缓冲液(5×,含DTT)是一种经过改良的以溴酚蓝为染料的5倍浓缩的蛋白上样缓冲液，产品含少量DTT，但不含有毒物质β-巯基乙醇，使蛋白上样操作相对安全健康。该试剂仅用于科研领域，不适用于临床诊断或其他用途。

实验案例

1、在室温或者不超过37℃的水浴中溶解本缓冲液,溶解后立即室温储存，避免长时间置于水浴中，试用完毕后立即-20℃储存。

2、取适量蛋白样品与本蛋白上样缓冲液按照4:1的比例充分混（如：吸取40μL蛋白样品加入10μL本蛋白上样缓冲液）。   

3、95℃水浴加热5-10min，以充分变性蛋白。

4、冷却到室温后，10000-14000rpm离心2-5min，取上清液直接进行电泳。

注意事项

1、本缓冲液含少量DTT，有轻微刺激性气味。

2、本缓冲液必需完全溶解才能使用，建议根据使用量盒使用频率进行分装，避免反复冻融。

3、如果蛋白样品浓度过高，与上样缓冲液混合前，应预先使用双蒸水稀释。

4、本产品用于蛋白变性时，建议95℃水浴或PCR仪加热5min，温度过高（如100℃）或时间过长（如超过15min），可能会导致蛋白降解或上样缓冲液中指示剂颜色异常。

5、本产品含有溴酚蓝指示剂，pH受温度影响，颜色可能有所不同，如低温冻存条件下，呈现深棕色或深蓝色凝固状态，不影响正常使用。

6、本产品稀释至1×后可以字节用于细胞或组织样品的裂解。

7、加热前通常会发现蛋白样品内有黏稠的半透明状物体，通常在本上样缓冲液内95℃水浴加热8-10min可使黏稠的半透明状物体消失，便于后续的上样操作。如果起始时细胞或组织的用量较大，基因组DNA含量较高，加热5-10min后仍可能有比较黏稠或者黏稠状的半透明物体，此时需要再加热5-10min或加入适量的1× 蛋白上样缓冲液后再加热3-5min。充分加热后一方面可使结合在基因组DNA上的蛋白充分稀释，同时可使基因组DNA断裂并使黏稠感消失。适当超声或使用1mL注射器反复抽吸也可以打断基因组DNA，从而使黏稠感消失。

8、为了您的安全盒健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

9、试剂开封后请尽快使用，以防影响后续实验效果。