Annexin V-FITC/PI细胞凋亡检测试剂盒

产品简介

磷脂酰丝氨酸(PS)只分布在正常细胞的细胞膜质双层的内侧，如细胞发生凋亡，则 细胞膜中的 PS 在细胞凋亡早期，会由脂膜内侧翻向外侧。

Annexin V 是一种分子量为 35-36kD 的 Ca2+依赖性磷脂结合蛋白，与 PS 有高度亲和力， 故可通过细胞外侧暴露的 PS 与调往早期细胞的细胞膜结合。因此 Annexin V 被作为检测细 胞早期凋亡的灵敏指标之一。将 Annexin V 进行荧光素(EGFP、FITC)标记，以标记了的 Annexin V 作为荧光探针，利用荧光显微镜活流式细胞仪可检测细胞凋亡的发生。

碘化丙啶(Propidium Iodide，PI)是一种核酸染料，它不能透过完整的细胞膜，但对凋 亡中晚期的细胞和死细胞，PI 能够透过细胞膜而使细胞核染红，因此将 Annexin V 与 PI 匹 配使用，就可以灵敏方便的将处于不同凋亡时期的细胞区分开来。在双变量流式细胞仪的散 点图上，左下象限显示活细胞，为(FITC-/ PI-); 右上象限是坏死细胞，为(FITC+/ PI+); 右下象限为凋亡细胞，为(FITC+/ PI-)。

注意事项

1、 由于细胞凋亡是一个快速的过程，建议样品在染色后1h内进行结果分析。

2、 如果用于流式细胞仪检测，可立即上机检测，Annexin V-FITC为绿色荧光，最大激发光/发射光波长为525/530nm，也能够使用488通道激发；PI为红色荧光，结合核酸后最大激发光/发射光波长为535/617nm。

3、 染色完成后可以不更换染色液，直接上机检测。如果不能立即检测，监狱去除染色液，使用PBS或Annexin V Binding Buffer重悬细胞。

4、 如果细胞在悬浮染色后使用荧光显微镜检测，建议1000g离心5min收集细胞，使用50-100μL Annexin V Binding Buffer轻轻重悬细胞，涂片后在荧光显微镜下观察。

5、 在初次使用流式细胞仪进行检测时，建议设置未染色、PI单染和Annexin V-FITC单染3组对照。

6、 在使用流式细胞仪进行检测时，如果发现Annexin V-FITC单独染色时出现了过多的PI假阳性细胞，并且通过调整相关设置和参数也无法改善，可以使用PBS将Annexin V-FITC稀释3-10倍后再进行检测。

7、 本试剂盒只适用于细胞模型的凋亡双染，也适用于检测精子凋亡，但不能用于检测组织样本中的凋亡。

8、 不同细胞系对PI的敏感度不同，请根据染色情况酌情调整PI用量。

9、 Annexin V-FITC通过结合磷脂酰丝氨酸（PS）对凋亡细胞进行标记，PS在不同种属间相对保守，因此本试剂盒适用于对不同种树的细胞进行凋亡检测，具体实验步骤可参考相关文献。

10、 本试剂盒能够和抗体一起对细胞进行染色，但建议分开染色，建议在抗体染色完成后将缓冲液更换为Annexin V Binding Buffer进行凋亡检测。

11、 如果样品为血液，必需去除血液中的血小板，因为血小板中的PS会干扰实验结果。

12、 神经细胞膜容易破坏外翻，从而导致假阳性，所以本试剂盒不适用于检测神经细胞的凋亡。

13、 操作中保持动作轻柔，离心后需确认管底是否有细胞。

14、 荧光染料均存在淬灭问题，实验过程中请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。

15、 为了您的健康和安全，请穿实验服并戴一次性手套操作。

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