线粒体呼吸链复合体Ⅰ含量检测试剂盒

产品简介

细胞呼吸链复合体Ⅰ（EC1.6.5.3）又称 NADH-CoQ 还原酶或 NADH 脱氢酶，广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞的线粒体中，是线粒体内膜中最大的蛋白复合物。该酶催化一对电子从NADH 传递给 CoQ，同时可使O2还原生 O2-，是呼吸电子传递链上产生O2-的主要部位。测定该酶活性，不仅可以反映呼吸电子传递链（ETC）状态，而且可以反映活性氧（ROS）生成状态。

复合体Ⅰ能够催化NADH脱氢生成NAD+，在340nm下测定 NADH 的氧化速率计算出该酶活性的大小。

试剂盒组成

样本处理方式

1、组织：称取约0.1g组织，加入1mL试剂一和10μL试剂三，进行冰浴匀浆。600g 4℃离心5min，取上清，转移至另一离心管，11000g 4℃离心10min，上清液即为去除线粒体的胞浆蛋白，可用于测定从线粒体泄漏的复合体Ⅰ（此步可选做）吸取上清后留下的沉淀即为线粒体，加入200μL试剂二和2μL试剂三，超声波破碎（冰浴，功率 20％或200W，超声3s，间隔10秒，重复30次），用于复合体Ⅰ酶活性测定。

2、细胞或者细菌：收集500万细菌，加入1mL试剂一和10μL试剂三，进行冰浴匀浆。600g 4℃离心5min，取上清，转移至另一离心管，11000g 4℃离心10min，上清液即为去除线粒体的胞浆蛋白，可用于测定从线粒体泄漏的复合体Ⅰ（此步可选做）吸取上清后留下的沉淀即为线粒体，加入200μL试剂二和2μL试剂三，超声波破碎（冰浴，功率 20％或200W，超声3s，间隔10秒，重复30次），用于复合体Ⅰ酶活性测定。

注意事项

1、工作液需要现配现用。

2、正式测定前，必需取2-3个预期差异较大的样本做预测定。

3、试剂六溶解前， 先短暂离心是，使试剂全部沉淀至瓶底。