Annexin V-FITC/PI细胞凋亡检测试剂盒

产品简介

磷脂酰丝氨酸（PS）只分布在正常细胞的细胞膜质双层的内侧，如细胞发生凋亡，则细胞膜中的PS在细胞凋亡早期，会由脂膜内侧翻向外侧。

Annexin V是一种分子量为35-36kD的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白，与PS有高度亲和力，故可通过细胞外侧暴露的PS与调往早期细胞的细胞膜结合。因此Annexin V被作为检测细胞早期凋亡的灵敏指标之一。将Annexin V进行荧光素（EGFP、FITC）标记，以标记了的Annexin V作为荧光探针，利用荧光显微镜活流式细胞仪可检测细胞凋亡的发生。

碘化丙啶（Propidium Iodide，PI）是一种核酸染料，它不能透过完整的细胞膜，但对凋亡中晚期的细胞和死细胞，PI能够透过细胞膜而使细胞核染红，因此将Annexin V 与PI匹配使用，就可以灵敏方便的将处于不同凋亡时期的细胞区分开来。在双变量流式细胞仪的散点图上，左下象限显示活细胞，为（FITC-/ PI-）； 右上象限是坏死细胞，为（FITC+/ PI+）；右下象限为凋亡细胞，为（FITC+/ PI-）。

光谱推荐：Annexin V-FITC: Ex/Em = 494/518 nm；

          PI: Ex/Em = 535/617 nm (with DNA)

注意事项

1、使用前请将产品瞬时离心至管底，再进行后续实验。

2、为降低细胞凋亡进程，孵育过程可在冰上操作，但孵育时间至少延长至30min。

3、由于细胞凋亡是一个快速的过程，建议样品在染色后1h之内进行分析。

4、对于贴壁细胞，消化是一个关键步骤。贴壁细胞诱导细胞凋亡时如有漂浮细胞，需收集漂浮细胞和贴壁细胞后合并染色。 处理贴壁细胞时要小心操作，尽量避免人为的损伤细胞。胰酶消化时间过短，细胞需要用力吹打才能脱落，容易造成细胞膜 的损伤，PI摄入过多；消化时间过长，细胞膜同样易造成损伤，甚至会影响细胞膜上磷脂酰丝氨酸与 FITC-Annexin V的结合。消化时将胰酶铺满孔板底后，轻摇时胰酶与细胞充分接触，然后倒掉大部分胰酶，利用剩余的少量胰酶再消化一段时间， 待细胞间空隙增大，瓶底呈花斑状即可终止。在消化液中尽量不用 EDTA，EDTA会影响 Annexin V与PS的结合。

5、贴壁细胞用胰蛋白酶消化后，建议在最佳培养条件和培养基中恢复约30min后染色，避免假阳性。

6、为了避免洗涤细胞时损失细胞，在吸液时可以用大的Tip头套上小的Tip头吸液。

7、染料的最佳使用浓度由具体实验要求确定。

8、荧光染料均存在淬灭问题，保存和使用过程中请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。

应用文献

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