γ-谷氨酰半胱氨酸连接酶（GCL）活性检测试剂盒

产品简介

γ-谷氨酰半胱氨酸连接酶（GCL） 是 GSH 合成的限速酶，GSH 对 GCL 有反馈抑制作用。GCL基因表达受多种因素调节，如氧化剂、抗氧化剂、生长因子和炎症因子等。GCL活性高低对GSH含量和GSH/GSSG比值有重要影响。

在ATP和Mg2+存在下，GCL催化谷氨酸和半胱氨酸合成γ-谷氨酰半胱氨酸；同时ATP去磷酸化产生无机磷分子，通过测定无机磷增加速率，即可计算出GCL活性。

试剂盒组成

样本处理方式

1、组织：称取约0.1g组织，加入1mL试剂一，冰浴匀浆后，8000g  4℃离心10min，取上清液置于冰上待测。

2、细菌或培养细胞：收集不少于 500 万个细胞，加入1mL试剂一, 超声破碎(冰浴, 功率 300W, 超声3s, 间隔7s, 总时间3min), 8000g 4℃离心 10min, 取上清液放置于4℃待测。

3、血清或血浆：直接检测。

注意事项

1、 样品处理等过程均需要在冰上进行，且须在当日测定酶活力，以免影响其活力。如果是匀浆液，避免反复冻融。

2、 所有试剂配制完后，除表明 4℃保存外，请于 1 天内用完。

3、 实验过程请带手套，试剂三中有强腐蚀性物质，注意不要溅到皮肤上或眼睛内。

4、 测定吸光值时请于水浴后 10～40 分钟内测完。

5、 样本测定前先取 1-2 个样做预实验，如吸光值太高，应先用试剂一(或者生理盐水)稀释到适当倍数，使得吸光值在标准曲线范围内，哺乳动物组织和血液一般稀释 3～5 倍。

6、 试剂三配制过程中，可能会产生黑色固体，其不影响结果，注意吸取时不要将黑色固体吸入。

7、 细胞中 GCL 活性测定时，细胞数目须在 300 万-500 万之间，细胞中 GCL 的提取时可加试剂一（或生理盐水）后研磨或超声波处理，不能用细胞裂解液处理细胞。