YFX0248
100管/96样
¥615
微量法
氧化型谷胱甘肽(GSSG)是谷胱甘肽(GSSG)的氧化形式,又称为二硫代谷胱甘 肽,是两分子的谷胱甘肽氧化而成。GSSG 会被谷胱甘肽还原酶还原成 GSSG,因此机体 中大多数是以还原型形式存在。测定细胞内 GSSG 和GSSG 含量以及 GSSG/GSSG 比 值,能够很好地反映细胞所处的氧化还原状态。
本试剂盒利用谷胱甘肽能和 5,5’-二硫代- 双-(2-硝基苯甲酸)(5,5’-dithiobis-2-nitrobenoicacid,DTNB)反应产生 2-硝基-5-巯基苯 甲酸,2-硝基-5-巯基苯甲酸在波长 412nm 处具有最大光吸收的特点,通过 2-乙烯吡啶抑 制样品中原有的还原型谷胱甘肽,然后利用谷胱甘肽还原酶将 GSSG 还原为 GSSG,借此 测定氧化型谷胱甘肽的含量。
1、组织:新鲜组织首先用 PBS 冲洗 2 次,然后称取动物组织或者植物组织 0.1g。加入用 试剂一润洗过的匀浆器中(匀浆器提前放冰上预冷);然后加入 1ml 试剂一(组织/试剂一 比例保持不变即可),迅速冰上充分研磨(使用液氮研磨效果更好);10000rpm 4℃离心 10min;取上清液放置于 4℃待测,若暂时不能完成测试可放于-80℃保存(可保存 10 天)。
2、细菌或细胞:收集不少于 10 8 个细胞,首先用 PBS 清洗细胞 2 次(PBS 重悬细胞, 600g 离心 10 分钟),加入 3 倍细胞沉淀体积的试剂一重悬细胞,反复冻融 2-3 次(可 在液氮中冻结,37℃水浴中溶解),8000g 离心 10 分钟,收集上清于 4℃待测,若暂时不 能完成测试可放于-80℃保存(可保存 10 天)。
3、血浆:将收集的抗凝血于 4℃,600g 离心 10 分钟,吸取上层血浆到另一支试管中,加 入等体积的试剂一, 4℃,8000g 离心 10 分钟,将上清移入新的试管中放置于 4℃待测,若 暂时不能完成测试可放于-80℃保存(可保存 10 天)。
4、血细胞:将收集的抗凝血于 4℃,600g 离心 10 分钟,弃去上层血浆用 3 倍体积的 PBS 清洗 3 次(用 PBS 重悬血细胞,600g 离心 10 分钟),加入等体积试剂一,混匀后 4℃ 放置 10 分钟,8000g 离心 10 分钟,吸取上清放于 4℃待测,若暂时不能完成测试可放于 -80℃保存(可保存 10 天)。
1、样品处理需匀浆完全,若当天不能完成测量,可放-80℃保存。
2、若不确定样品中 GSH 含量的高低,可稀释几个梯度后再进行测量。
3、因为试剂一中含有蛋白质沉淀剂,因此上清液不能用于蛋白浓度测定。
4、此方法利用酶促反应速率计算底物浓度,尽量准确在 30 秒和 150 秒处完成读数。