氧化型谷胱甘肽（GSSG）含量检测试剂盒

产品简介

氧化型谷胱甘肽（GSSG）是谷胱甘肽（GSH）的氧化形式，又称为二硫代谷胱甘 肽，是两分子的谷胱甘肽氧化而成。GSSG 会被谷胱甘肽还原酶还原成 GSH，因此机体 中大多数是以还原型形式存在。测定细胞内 GSH 和GSSG 含量以及 GSH/GSSG 比值，能 够很好地反映细胞所处的氧化还原状态。

本 试 剂 盒 利 用 谷 胱 甘 肽 能 和 5 ，5’- 二 硫 代 - 双 -（ 2- 硝 基 苯 甲 酸 ）（ 5 ， 5’-dithiobis-2-nitrobenoic acid，DTNB）反应产生 2-硝基-5-巯基苯甲酸，2-硝基-5-巯基苯 甲酸在波长 412nm 处具有最大光吸收的特点，通过 2-乙烯吡啶抑制样品中原有的还原型 谷胱甘肽，然后利用谷胱甘肽还原酶将 GSSG 还原为 GSH，借此测定氧化型谷胱甘肽的 含量。

试剂盒组成

样本处理方式

1、 组织：首先用 PBS 冲洗2 次，然后称取动物组织或者植物组织 0.1g。加入用试剂一润洗过的 匀浆器中（匀浆器提前放冰上预冷）；然后加入 1mL 试剂一（组织/试剂一比例保持不变即可）， 迅速冰上充分研磨（使用液氮研磨效果更好）；8000g 4℃离心 10min；取上清液放置于 4℃待测， 若暂时不能完成测试可放于-80℃保存（可保存 10 天）。

2、 血浆：将收集的抗凝血于 4℃，600g 离心 10 分钟，吸取上层血浆到另一支试管中， 加入等体积的试剂一，4℃，8000g 离心 10 分钟，将上清移入新的试管中放置于 4℃待测，若 暂时不能完成测试可放于-80℃保存（可保存 10 天）。

3、 血细胞：将收集的抗凝血于 4℃，600g 离心 10 分钟，弃去上层血浆用 3 倍体积的 PBS 清洗 3 次（用PBS 重悬血细胞，600g 离心 10 分钟），加入等体积试剂一，混匀后 4℃放置 10 分钟， 8000g 离心 10 分钟，吸取上清放于 4℃待测，若暂时不能完成测试可放于-80℃保存（可保存 10 天）。

4、细胞：收集不少于 10 6 个细胞，首先用 PBS 清洗细胞 2 次（PBS 重悬细胞，600g 离心 10 分钟）， 加入 3 倍细胞沉淀体积的试剂一重悬细胞，反复冻融 2-3 次（可在液氮中冻结，37℃水浴中溶解）， 8000g离心 10 分钟，收集上清于 4℃待测，若暂时不能完成测试可放于-80℃保存（可保存 10 天）。

注意事项

1、样品处理需匀浆完全，若当天不能完成测量，可放-80℃保存。

2、若不确定样品中 GSSG 含量的高低，可稀释几个梯度后再进行测量。

3、此方法利用酶促反应速率计算底物浓度，尽量准确在 30 秒和 150 秒处完成读数。

4、因为试剂一中含有蛋白质沉淀剂，因此上清液不能用于蛋白浓度测定。