YFXEH00034
48T/ 96T
￥1000/ ￥1500
检测人相关样本中肿瘤坏死因子α(TNF-α)的含量
人
双抗体一步夹心法
本试剂盒采用双抗体一步夹心法测定标本中肿瘤坏死因子α(TNF-α)的水平。向预先包被肿瘤坏死因子α(TNF-α)抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的肿瘤坏死因子α(TNF-α)呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。
1、准确性：标准品线性回归与预期浓度相关系数R值≥ 0.9900。
2、灵敏度：最低检测浓度小于1.0 pg/mL。
检测人相关样本中的肿瘤坏死因子α(TNF- α)，且与其它相关蛋白无明显交叉反应。
重复性：板内、板间变异系数均小于15%。
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试剂盒成分 |
96孔 |
48孔 |
储存温度 |
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说明书 |
1份 |
1份 |
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封板膜 |
2片（48） |
2片（96） |
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密封袋 |
1个 |
1个 |
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微孔酶标板 |
12孔×8条 |
12孔×4条 |
2-8℃ |
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标准品 |
0.3mL*6管 |
0.3mL*6管 |
2-8℃ |
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注：标准品（S0-S5）浓度依次为：0pg/mL、5pg/mL、10pg/mL、20pg/mL、40pg/mL、80pg/mL。 |
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样本稀释液 |
6mL |
3mL |
2-8℃ |
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检测抗体-HRP |
10mL |
5mL |
2-8℃ |
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20×洗涤缓冲液 |
25mL |
15mL |
2-8℃ |
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注：20×洗涤缓冲液使用前用蒸馏水按1：20的比例稀释，即1份的20×洗涤缓冲液加19份的蒸馏水。 |
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底物A |
6mL |
3mL |
2-8℃ |
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底物B |
6mL |
3mL |
2-8℃ |
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终止液 |
6mL |
3mL |
2-8℃ |
1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。
2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。
3. 尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。
4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
5. 组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4（建议组织重量与PBS体积比例为1:9，即1g组织，加入 9mL PBS）。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。
6. 标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融.
7. 不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
1、试剂盒保存在2-8℃，使用前室温平衡20分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶完全溶解后再使用。
2、实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。
3、浓度为0的S0号标准品即可视为阴性对照或者空白；按照说明书操作时样本已经稀释5倍，最终结果乘以5才是样本实际浓度。
4、严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。
5、所有液体组分使用前充分摇匀。
※ IF=11.413. Kefeng Zhai, Hong Duan, Wei Wang, et al. Ginsenoside Rg1 ameliorates bloodebrain barrier disruption and traumatic brain injury via attenuating macrophages derived exosomes miR-21 release. Acta Pharmaceutica Sinica B. 2021 Nov;11(11):3493-3507.
※ IF=5.279. Ke-feng Zhai, Cai-yue Cui, et al. Liquiritin from Glycyrrhiza uralensis Attenuating Rheumatoid Arthritis via Reducing Inflammation, Suppressing Angiogenesis, and Inhibiting MAPK Signaling Pathway. Agric. Food Chem. 2019, 67, 10, 2856–2864.
