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ELISA实验FAQ

发布时间:2023-03-15 浏览次数:759

1、样本如何进行稀释?

组织样本是按照1:9关系匀浆。相当于0.5g+4.5mlPBS。样本是血清、血浆按照说明书上的。

2、检测范围:跨度设定的是5个点,最大标准浓度只能设定8个点,为什么试剂盒的检测范围无法满足实际检测范围时?

试剂盒本身对样本种类都要适应,有的样本含有量高,有的低,不可能为每个老师样本实际浓度来设定试剂盒,如果涉及到范围调整,退回重新质控换就行。

3、标准品需要做复孔吗?

建议是做复孔,也就是一个浓度设定2个孔,不建议标准做单孔,如果标准品做的不好,样本哪怕做的最好也没多少意义,空白孔只需要做一个就行。

4、不加样本稀释液行不行,不稀释5倍?还有,显色液A、B不同的试剂是否能通用?

如果样本含量偏低,可以不稀释,但对于细胞培养上清和血浆这2类样本,建议是稀释一下为好(细胞培养上清可能含有血清培养基,稀释是为减少对检测 的影响)。显色液A和显色液B隶属于TMB显色系统。是可以通用的。

5、牛奶样本任何处理?

处理1:

取10ml牛奶放入离心管,加入10ml乙酸乙酯,超声震荡30min,然后4000g离心10min(如两相之间出现乳化层,则将样品瓶放在80℃的水浴中约5min,再离心)移取1ml乙酸乙酯层至另外试管中,60℃氮气流下蒸干,残留物用缓冲液2ml缓冲后备用,前处理过程约需2小时。

处理2:

取10ml牛奶10℃3500G离心10MIN,祛除上层脂肪,取5ml脱脂奶粉加入150微升17.2%亚铁氰化钾,出现沉淀,漩涡混合,然后加入150微升53.5%硫酸锌。再次漩涡混合。15摄氏度3500g离心10分钟,取上层清液用缓冲液1:2稀释待用,前处理过程所需1小时。

6、活性检测试剂盒 里面的标准品的活性是怎么定义的?

单纯的活性定义;是单位时间内催化反应底物的量代表有个酶活,即1个国际单位。通常直接检测酶活的方法学选取比色法,但这个比色法是有明晰的底物才能选用。 酶联法检测酶活的原理是通过活性定标后,通过活性和含量成正比例关系检测酶活,只不过是间接反映酶活的一个方式。

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